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通道载玻片内细胞培养方法介绍
点击次数↛↭↭:1655 发布日期↭ↄ:2019-4-22  来源ↄ•ↄ↭:本站 仅供参考↭ↄ↭↛,谢绝转载↭ↄ,否则责任自负
 
本应用简报说明了如何在细胞培养微通道内生长贴壁细胞↛↛。将描述细胞接种↛ↄↄↄ,培养基交换和光学性质•↭ↄ••。另外ↄ•↭,显示了细胞培养通道和标准开放孔格式之间的主要差异↭ↄ↛。
 
为了显示细胞接种和μ-slide处理↛↛,使用μ-slide vi 0.4进行演示ↄ•↛。像通常方法一样制备细胞悬液(例如3×105细胞/ ml)并将30μl加到通道中ↄ↛ↄ。将移液管尖端放在通道的入口上↛•ↄ↭,并如图所示指向通道↛↭。快速分配并填充整个渠道↭↛。
细胞附着后ↄↄ↛ↄ,如上图所示ↄ↛•↭↛,将60μl无细胞培养基填充到每个通道中ↄↄ↛。注意避免气泡ↄ↭↭↛。如果在细胞粘附后进行填充步骤↛↛•↭,则不会将细胞冲洗出通道••。如果您想在细胞接种后立即填充通道•↭↭,请小心移液↛•ↄ。
 
μ-slide vi 0.4在显微镜观察时已充满细胞和培养基•ↄ↭。
 
填充μ-slide vi 0.4的luer储液孔ↄ↭。
 
2.培养基交换
a.连续介质交换 - 推荐使用
对于连续介质更换ↄ↛•,首先从储存器中移除旧介质↛ↄ↭。然后ↄ↭,将适量的新鲜培养基加入一个储液器中↭•ↄ,同时从另一个储液孔中吸出•↛•。小心使用细胞培养移液器↭↛↛ↄ。建议体积至少是通道容积的3倍ↄ↭ↄ↛。重新填充储液器••ↄ。
 
连续交换介质体积为3倍的介质↛↭ↄ↛。
 
b.完全的培养液交换 - 仅适用于昂贵的液体
 
如果仅仅更换通道内液体↛↭,请先清空通道↛•↛ↄ。然后ↄↄ↭,将移液管尖端放在通道入口上•••,并小心地将液体从通道中吸出↭↛。使用细胞培养移液器彻底清除所有液体↛••↛。为了重新填充通道••↛↛•,将通道容量的新鲜介质直接注入通道↛↛↭。避免产生气泡↛ↄ↭↭•。重新填充两边的蓄液孔ↄↄ↭。
 
完全清空通道可能导致重新填充后形成气泡ↄ↛↭。
 
通道和储存孔液体完全替换ↄ↭↭。
 
 
3.通道载玻片与多孔载玻片
在下面部分•ↄ↭,将μ-slide vi 0.4(细胞培养通道)的特性与μ-slide 8孔(开放格式)进行比较•••↭。
 
对于接种细胞↛↭,主要差异是结构内部液体的高度ↄ↭。两个系统的小区域部分如下所示↭↛↛•↛。μ-slide vi 0.4通道内部底部和顶部之间的距离为400μm↭•↛•。填充的μ-slide 8孔载玻片没有顶部结构•ↄ。在8孔载玻片里面↭↭ↄ,培养基约为0.3毫↛↭↛•,通道载玻片比开放格式8孔载玻片薄7.5倍↛••。
 
对于细胞接种↭↛↭↭↛,必须应用不同的细胞密度以在表面上获得相同量的细胞↭••。在该示例中↭↛,目标是接种25个细胞/单位面积↭ↄ↛。由于μ-slide 8孔内液体的高度是7.5倍↭↭•ↄ,因此应用的细胞浓度必须低于相同的因子ↄ↭↛•。
 
 
基于不同高度的液体内部μ-slide vi 0.4和μ-slide 8孔•↛ↄ。在上面的例子中↛•↭↛,相同的生长区域和细胞数量但不同的体积导致所需的细胞浓度不同↭•。
 
 
为了获得相当程度的融合ↄ•ↄ••,建议使用3 ... 7 x 105细胞/ ml(μ-slide vi 0.4)和4 ... 9 x 104细胞/ ml(μ-slide 8孔)↛•••。这是两个几何形状之间相同的~7.5倍↭↭↛。细胞粘附后••,每单位面积的细胞数相同ↄ↛↛↛。
 
由于不同的高度ↄ•,不同的细胞浓度产生相同等级的细胞聚合•↭。
 
4.通道μ-slide的优点
与标准开孔格式相比•↛↭,通道载玻片具有很强的优势•↭↭•。
 
a.相差显微成像效果更好
通道几何结构很方便使用相差显微镜↭↭↭↭,因为没有凹液面的影响↭↭,整个生长区域可以用相差技术观察•↛↭。
 
与开放式多孔载玻片不同•ↄ•,通道载玻片不会干扰相差显微镜的光束路径ↄↄ↭•,从而获得更好的相差效果•ↄ•。
 

开放式多孔培养板(图a,图b)↛↛↛:凹液面影响了了相差效果•ↄ↛ↄ↭。只有中心部位能提供高质量的对比度↛•••。
 
通道式载玻片(图c,图d)↛•ↄ↛ↄ:在通道几何结构中↭ↄ↛,光束路径始终对齐ↄ↛。整个视野都可以提供高质量的相差显微镜成像↭•。
 
 
b.细胞分布均匀
 
在通道中↭↛↛,因为边缘效应小↛↭•,贴壁细胞的同质性要好得多ↄↄ。
 
下面的显微图像ↄ↭↭↭↛,相差(a)和荧光(b)模式中显示了开放孔(1-3)中细胞分布的不均匀性和细胞培养通道(4-6)中的同质性↛↭↭↭。
 
1     开放式多孔载玻片ↄ•••,边缘位置成像
2     开放式多孔载玻片ↄ•ↄ↛ↄ,随机位置成像
3   开放式多孔载玻片↛↛•,中心部分
4     通道载玻片↛•↛ↄ,边缘位置成像
5     通道载玻片↛ↄ,随机位置成像
6   通道载玻片↭↭•,中心位置成像
 
 
来源↛ↄ↭:广州科适特科学仪器有限
联系电话↛↛:020-38102730
e-mail↭↭:[email protected]

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